制備型液相色譜儀通常由以下部分組成:
儲液瓶:用于儲存流動相。
高壓泵:提供穩定的高壓流動相,將流動相輸送到色譜柱中。
進樣系統:包括進樣器和進樣閥,用于將樣品注入到流動相中。
色譜柱:是分離的核心部件,內部填充有固定相,根據樣品組分在固定相和流動相中的分配系數不同進行分離。
檢測器:用于檢測分離后的組分,并將信號轉換為電信號進行記錄和分析。
廢液瓶:用于收集廢液。
主要特點
高分離效能:能夠高效地分離復雜混合物中的各個組分。
高靈敏度:能夠檢測到微量組分。
靈活性:可根據實驗需求選擇不同的分離模式和檢測器。
自動化程度高:通常采用計算機控制,可實現自動化操作和數據采集。
應用領域
制備型液相色譜儀在多個領域都有廣泛的應用,包括但不限于:
天然藥物化學和中藥化學研究:用于從復雜的植物提取物中分離和純化微量的有效成分。
蛋白純化:用于從復雜的生物樣品中分離和純化目標蛋白質。
藥物雜質純化:用于從藥物樣品中分離和純化雜質,保證藥物的安全性和有效性。
食品科學:用于食品成分的分析和純化。
化工和材料科學:用于有機化合物的分離和純化,以及高分子材料的表征和純化。
操作規程
以Gilson制備液相色譜儀為例,其操作規程通常包括以下幾個步驟:
環境檢查:確保實驗室環境符合儀器運行要求,包括溫度、濕度及通風條件。
儀器檢查:檢查色譜柱、檢測器、高壓輸液泵等配件是否完好。
流動相配制:根據實驗需求,選擇合適的流動相溶劑,并進行必要的配制和過濾處理,確保流動相純凈無氣泡。
儀器啟動:接通電腦和儀器電源,按照順序開啟儀器電源開關。通過儀器聯機軟件進入操作界面,檢查流動相是否充足,并記錄儀器上顯示的溶劑量。
參數設置:設置泵流速,并觀察儀器中是否有液體穩定流出。待系統壓力穩定后,進行波長調整等準備工作。
樣品處理:將待分離的樣品溶液進行過濾和濃縮處理,以便更好地進行色譜分離。
進樣:使用移液器準確吸取一定量樣品溶液,通過進樣針注入色譜柱中。
分離與收集:根據實驗需要,調整流動相的極性和梯度洗脫程序,使樣品分子在色譜柱中得到有效分離。根據色譜圖上的峰形和出峰時間,收集目標組分。可使用試管接取或連續接取模式,確保收集到純凈的目標產物。
檢測與驗證:使用適當的檢測器(如紫外檢測器、質譜檢測器等)對收集到的樣品進行檢測,以驗證分離效果。
儀器關閉與維護:實驗結束后,按照操作規程關閉儀器電源和電腦。使用適當的溶劑沖洗色譜柱和管路,以保持儀器性能穩定。定期檢查和更換色譜柱填料、過濾白頭等易耗品,確保儀器長期穩定運行。